M Masalah kesehatan yang dikeluhkan oleh masyarakat Indonesia adalah periodontitis yang disebabkan oleh biofilm gigi. Biofilm Aggregatibacter actinomycetemcomitans menunjukkan resistensi yang lebih tinggi terhadap aplikasi antibiotik daripada sel planktonik, sehingga penelitian dikembangkan dalam pemanfaatan bahan alami yang efektif dan aman yaitu tanaman siwak (Salvadora persica). Tujuan: Mengetahui efektivitas ekstrak siwak (Salvadora persica) terhadap densitas biofilm Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Metode: Penelitian ini menggunakan metode eksperimental laboratoris dengan rancangan penelitian post-test only control group design. Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak siwak (Salvadora persica) yang telah dilakukan proses maserasi dan bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans yang telah dilakukan kultur dengan medium BHI broth. Bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans diberi perlakuan terhadap ekstrak siwak (Salvadora persica), dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12.5%, 6.25%, 3.12%, 1.5%. Pengukuran densitas biofilm dengan microplate reader pada panjang gelombang 490 nm dan pewarnaan crystal violet. Hasil: Uji fitokimia ekstrak siwak (Salvadora persica) dari laboratorium Balitro menunjukkan kandungan senyawa alkaloid, saponin, tannin, flavonoid, dan glikosida. Hasil uji normalitas menggunakan metode Shapiro-wilk pada masa inkubasi 1 jam, 3 jam, dan 24 jam menunjukkan data terdistribusi normal (p>0,05). Hasil uji ANOVA satu jalan pada ketiga masa inkubasi menunjukkan data berbeda bermakna (p<0,05) dengan nilai p=0.000. Hasil uji Post-Hoc LSD menunjukkan perbedaan dari kemaknaan pada setiap konsentrasi pada tiap masa inkubasi. Kesimpulan: Terdapat pengaruh dari ekstrak siwak (Salvadora persica) dengan zona hambat paling tinggi terhadap densitas biofilm Aggregatibacter actinomycetemcomitans pada konsentrasi 25%.