B Bakteri penyebab penyakit periodontal yang utama adalah bakteri Gram negatif yang salah satunya adalah Treponema denticola. Penyakit periodontal menduduki urutan ke dua penyakit utama yang masih merupakan masalah di Indonesia. Persentase penduduk yang mempunyai masalah gigi dan mulut menurut Riskesdas tahun 2007 dan 2013 meningkat dari 23,2% menjadi 25,9%. Ekstrak buah delima (Tunica granatum) memiliki kandungan flavonoid, tanin dan punnicalagin yang berperan sebagai antibakteri, antijamur, dan antivirus serta modulasi kekebalan tubuh. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya hambat ekstrak buah delima terhadap viabilitas biofilm Treponema denticola. Pada penelitian ini menggunakan bakteri T. denticola dengan OD 0,2 (3xl07 CFU/mL) yang didistribusikan ke dalam 96 well-plate yang telah dilapisi saliva dan diinkubasi selama 2x24 jam dalam suasana anaerob untuk membentuk biofilm. Ekstrak buah delima dilakukan penggerusan dengan menggunakan juicer, lalu diencerkan menggunakan akuades dalam konsentrasi yang berbeda (100%, 50%, 25%, 12,5%). Setelah itu, ekstrak buah P. granatum didistribusikan ke dalam well-plate yang sebelumnya terdapat biofilm dan diinkubasi dengan tiga masa inkubasi (1,6, dan 24 jam). Optical Density (OD) biofilm diukur menggunakan Microplate Reader dengan panjang gelombang 490nm. Hasil penelitian menunjukkan terdapat penurunan OD dari biofilm setelah diberikan ekstrak P. granatum. Pada uji normalitas menunjukkan bahwa data terdistribusi nornal (p >0,05) dan dilanjutkan dengan uji one way ANOVA dan uji Post Hoc LSD yang menunjukkan adanya perbedaan signifikan (p <0,05). Terlihat bahwa konsentrasi ekstrak terbaik adalah 25% pada masa inkubasi 1 jam. Penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak buah Punica granatum memiliki efek hambat terhadap biofilm Treponema denticola dan kemungkinan dapat dijadikan obat yang dapat menghambat Treponema denticola.