L Latar belakang : karsinoma sel skuamosa (kss) merupakan penyakit jenis kanker rongga mulut yang dapat bermetastasis ke kelenjar getah bening, perawatan konvensional kss memiliki efek samping. alternatif baru berbasis bahan alam diperlukan untuk meminimalkan efek samping tersebut. catharanthus roseus mengandung senyawa alkaloid yang berpotensi sebagai antikanker dan jalur pensinyalan phosphatidylinositol 3-kinase (pi3k) berperan dalam proliferasi serta kelangsungan hidup sel kanker dan menjadi target molekuler yang relavan pada kanker lidah hsc-3. tujuan: mengetahui potensi ekstrak etanol daun catharanthus roseus (eedcr) dalam menurunkan aktivitas jalur pensinyalan pi3k pada sel kanker lidah hsc-3. metode: sel hsc-3 dibagi menjadi 6 kelompok perlakuan yaitu, kontrol negatif tanpa perlakuan, kontrol positif wortmannin 1 µm, serta perlakuan eedcr pada konsentrasi (6,25; 12,5; 25; dan 50 µg/ml) selama 1 jam. aktivitas pi3k dinilai menggunakan elisa melalui pada rasio absorbansi p-pi3k. hasil: perlakuan eedcr menurunkan rasio absorbansi p-pi3k terhadap pi3k pada sel hsc-3 secara bertahap seiring dengan peningkatan kosentrasi. rasio absorbansi p-pi3k terhadap pi3k pada kontrol negatif sebesar 1,150±0,033, sedangkan pada kontrol positif perlakuan wortmannin 1 µm sebesar 0,153±0,033. perlakuan eedcr mulai menunjukkan penurunan signifikan pada kosentrasi 12,5 µg/ml (0,745±0,063), dan mencapai nilai terendah pada kosentrasi 50 µg/ml (0,280±0,054) kesimpulan: eedcr berpotensi menurunkan aktivitas jalur pensinyalan pi3k pada sel kanker lidah hsc-3.